基于外泌体相关基因的全基因组微扰分析筛选系统
发布时间：
2024-07-12
来源：
https://doi.org/10.1101/2023.09.07.556640
作者:陆路1#，尹建新1#，陈宁1#，郭晓飞1#，韩春乐1#，王淼1#，杜焕青1#，李慧芳1#，潘新刚1#，高梦雅1#，王娜1#，齐冬丽1#，王建红1#，董凤伟1#，李天石2 #，葛啸虎1*
发布日期:2023-09-08
摘要:据报道，外泌体对体内生理和病理状态有重要影响。外泌体作为一种药物传递载体已被广泛研究，一些外泌体药物已进入临床研究阶段。外泌体的产生、运输和分泌机制仍有待深入研究。因此，在这里，我们开发了一种新的基于CRISPR uni的基因筛选系统，通过该系统，我们可以在全基因组范围内揭示外泌体的生物发生、运输和摄取机制。该系统由两部分组成:一部分是基因敲除组件;另一部分是一个独特的分子标识(UMI)标记组件，它可以标记敲除细胞产生的外泌体，其中每个sgRNA对应一个特定的UMI。这样，通过检测外泌体中装载的UMI，我们可以追踪敲除基因。在本研究中，我们首先分别使用质粒和慢病毒验证了每个组分的功能。接下来，我们使用单个慢病毒模拟慢病毒库对细胞的感染，以验证筛选系统的功能。最后，我们构建了一个基于crispr - uni的文库，针对15个基因(对外泌体生物发生有明确影响的基因)，进一步验证筛选系统的可靠性。该筛选系统的开发对于深入研究外泌体的产生和分泌机制，以及提高外泌体的产生和体外循环功能具有重要的意义。
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