07-12
外泌体负载的SARS-CoV-2 RBD mRNA在小鼠的十二指肠内传递诱导了中和抗体反应
引起2019冠状病毒病(COVID-19)的严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)给全球健康带来了诸多挑战。包括脂质纳米颗粒mRNA、灭活病毒和重组蛋白在内的疫苗已被用于临床预防SARS-CoV-2感染，并在控制大流行方面发挥了巨大作用。在这里，我们提出并评估了一种基于牛乳源性外泌体(milk-exos)的口服mRNA疫苗，该疫苗编码SARS-CoV-2受体结合域(RBD)作为免疫原。结果表明，乳源性外泌体传递的RBD mRNA可在体外293细胞中产生分泌的RBD肽，并刺激小鼠抗RBD的中和抗体。这些结果表明，用牛乳源性外泌体装载SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗是一种简单、廉价、新颖的在体内引入针对SARS-CoV-2免疫的方法。此外，它还可以作为一种新的mRNA口服递送系统。
07-12
外泌体作为细胞间通讯载体参与了许多生物过程。由于外泌体作为细胞和基因治疗以及药物递送应用的天然载体被越来越多地探索，因此拥有高质量的样品至关重要。蛋白:颗粒比法、ELISA法、western blotting法、聚合酶链反应法和排粒径高效液相色谱法是近年来广泛应用于外泌体纯度分析的主要方法。然而，目前还没有一种行之有效的方法可以方便地对外泌体样品中的小尺寸杂质进行常规质量分析。本文采用尺寸排除高效液相色谱法(SE-HPLC)、离子交换高效液相色谱法(IEX-HPLC)和新型二维高效液相色谱法(2D-HPLC)对牛乳源性外泌体的纯度进行了检测，并对不同的外泌体分离工艺进行了详细的研究。结果表明，2D-HPLC法能够提高检测外泌体纯度的准确性，具有较高的仪器精度和准确性，减少了人员误差和实验成本，大大缩短了分析时间，自动化程度更高。2D-HPLC方法快速、选择性高、灵敏度好，适用于外泌体的药物和毒理学分析。
07-12
据报道，外泌体对体内生理和病理状态有重要影响。外泌体作为一种药物传递载体已被广泛研究，一些外泌体药物已进入临床研究阶段。外泌体的产生、运输和分泌机制仍有待深入研究。因此，在这里，我们开发了一种新的基于CRISPR uni的基因筛选系统，通过该系统，我们可以在全基因组范围内揭示外泌体的生物发生、运输和摄取机制。该系统由两部分组成:一部分是基因敲除组件;另一部分是一个独特的分子标识(UMI)标记组件，它可以标记敲除细胞产生的外泌体，其中每个sgRNA对应一个特定的UMI。这样，通过检测外泌体中装载的UMI，我们可以追踪敲除基因。在本研究中，我们首先分别使用质粒和慢病毒验证了每个组分的功能。接下来，我们使用单个慢病毒模拟慢病毒库对细胞的感染，以验证筛选系统的功能。
07-12
采用密度离心法纯化牛乳外泌体，研究其对皮肤屏障的影响。TEM、nanoFCM、Western-blot、LC-MS和BCA检测表明，所获得的牛乳外泌体为高纯度的外泌体产物，其外观、粒度和标记物符合牛乳外泌体的典型特征液。然后使用蛋白质组学。结果表明，牛奶外泌体有助于细胞间的粘附，表明其具有皮肤屏障修复的作用。然后将HaCat细胞与牛乳外泌体孵育，细胞蛋白质组学分析证实，在所有剂量下，牛乳外泌体都上调了紧密连接蛋白Claudin-1和Claudin-6，下调了PPP2R1A和PPP2R2A等负调控因子。与蛋白质组学结果相一致的分子分析表明，Claudin-1在转录和翻译水平上均上调。然后用荧光染料标记牛乳外泌体并局部涂于小鼠皮肤上。用荧光共聚焦显微镜观察了标记的牛乳外泌体的表皮痕迹。免疫组化检测进一步证实，Claudin-1外用小鼠皮肤48小时后增强。
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07-12
乳外泌体(MK-exo)对消费者的健康具有生物活性，是一种优良的药物传递载体。然而，长期保存和运输仍然是目前的主要挑战。本报告大规模制备了高质量的MK-exo。然后，我们开发了一种属于MK-exo的冻干方法，并对冻干后的MK-exo进行了加速和长期稳定性实验，以评估冻干的效果。结果表明，MK-exo冻干后可在室温下保存至少3个月，在2-8℃下保存15个月。这些发现为进一步了解MK-exo的性质和应用提供了数据支持。